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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Milho e Sorgo. |
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Data corrente: |
09/10/2018 |
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Data da última atualização: |
12/02/2019 |
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Tipo da produção científica: |
Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento |
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Autoria: |
COSTA, J. F. da V.; LOPES, S. da S.; BARROS, B. de A.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de. |
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Afiliação: |
Jéssica Fabiane da Veiga Costa, Centro Universitário de Sete Lagoas - UNIFEMM; Simara da Silva Lopes, Universidade Federal de São João de Rei; BEATRIZ DE ALMEIDA BARROS, CNPMS; ANDREA ALMEIDA CARNEIRO, CNPMS; SYLVIA MORAIS DE SOUSA TINOCO, CNPMS. |
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Título: |
Determinação do número de cópias de transgenes em eventos de tabaco por PCR em tempo real. |
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Ano de publicação: |
2018 |
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Fonte/Imprenta: |
Sete Lagoas: Embrapa Milho e Sorgo, 2018. |
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Páginas: |
23 p. |
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Série: |
(Embrapa Milho e Sorgo. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 168). |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
Por causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para confirmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado no vetor pGEM-T Easy e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de tabaco transgênico T0 fora avaliados com o método 2-?Ct para determinar o número relativo de cópias do gene Bar no genoma, utilizando Axi1 como gene de referência. Uma amostra com uma cópia (ZmPstol8.02 Ev.6) foi estabelecida pelo metódo 2-?Ct e utilizada como referência de cópia única usando o método 2-??Ct. Os resultados da determinação do número de cópias foram concordantes com as taxas de segregação em plantas T1 com o genótipo Bar de cada evento. Todos os três eventos cópia únicas tiveram segregação Mendeliana de 3:1 e esses resultados confirmam que Axi1 é um gene cópia única e pode ser usado como um controle endógeno para avaliar o número de cópias com o método 2-??Ct em tabaco transgênico. MenosPor causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765)... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Transgênico. |
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Thesagro: |
Engenharia Genética; Planta Transgênica. |
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Categoria do assunto: |
G Melhoramento Genético |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/184128/1/bol-168.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Milho e Sorgo (CNPMS) |
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Biblioteca |
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| Registros recuperados : 526 | |
| 42. |  | BORDRN, B.; OLIVEIRA, R. K. de; HIGA, R. C. V.; OLIVEIRA, I. R. de; ZANATTA, J. A. Adaptação agrícola e florestal às mudanças climáticas. In: ANDREOLI, C. V.; PHILIPPI JUNIOR, A. (ed.). Sustentabilidade no agronegócio. Santana de Parnaiba: Manole, 2021. cap. 19, p. 537-560. (Ambiental, 28).| Tipo: Capítulo em Livro Técnico-Científico |
| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 43. | | LEITE, T. B.; CRIZEL, G. R.; OLIVEIRA, I. R. de; FLORES CANTILLANO, R. F.; ROMBALDI, C. V. Alterações nos teores de ácido ascórbico, antocianinas e carotenoides em morangos produzidos a partir de mudas de matrizes radiadas com uv-c. In: ENCONTRO DE PÓS-GRADUAÇÃO, 14., 2012, Pelotas. Anais... Pelotas: UFPel, 2012. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
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| 45. | | YAMAMOTO, L. Y.; KOYAMA, R.; ASSIS, A. M. de; BORGES, W. F. S.; OLIVEIRA, I. R. de; ROBERTO, S. R. Color of berry and juice of 'isabel' grape treated with abscisic acid in different ripening stages. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, DF, v. 50, n. 12, p. 1160-1167, dez. 2015. Título em português: Cor das bagas e do suco da uva 'Isabel' tratada com ácido abscísico em diferentes fases de maturação.| Biblioteca(s): Embrapa Unidades Centrais. |
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| 49. | | CARVALHO, L. M. de; NUNES, M. U. C.; OLIVEIRA, I. R. de; LEAL, M. de L. da S. Produtividade do tomateiro em cultivo solteiro e consorciado com espécies aromática e medicinais. Horticultura Brasileira, Brasília, DF, v. 27, n. 4, out.\dez., 2009.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 1 |
| Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 50. | | RODRIGUES, C. S.; CARVALHO, H. W. L. de; OLIVEIRA, I. R. de; SILVA, B. S. de F.; MENEZES, A. F. Avaliação de cultivares de mandioca brava no município de Nossa Senhora das Dores-SE. In: ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA, 18; ENCONTRO DE PÓS-GRADUAÇÃO, 4., 2008, São Cristóvão. Anais... São Cristóvão: UFS, 2008. Ciências agrárias. 1 CD-ROM.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 52. | | RIBEIRO, S. S.; CARVALHO, H. W. L. de; FUKUDA, W. M. G.; OLIVEIRA, I. R. de; OLIVEIRA, V. D. de. Avaliação de cultivares de mandioca para consumo humano na zona centro-sul do Estado de Sergipe. In: CONGRESSO BRASILEIRO DA MANDIOCA, 12., 2007, Paranavaí. Mandioca: bioenergia, alimento e renda. Botucatu: CERAT- UNESP, [2007].| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Mandioca e Fruticultura. |
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| 53. | | CASTRO, C. R.; CARVALHO, H. W. L. de; RANGEL, M. A. S.; SANTOS, V. da S.; OLIVEIRA, I. R. de. Avaliação de cultivares de mandioca na Microrregião de Lagarto do Estado de Sergipe, no ano agrícola de 2007/2008. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE MANDIOCA, 14.; FEIRA BRASILEIRA DA MANDIOCA, 1., 2011, Maceió. Mandioca: fonte de alimento e energia: anais. Maceió: ABAM: SBM, 2011. 1 CD ROM. Melhoramento genético. Resumo 58.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Mandioca e Fruticultura. |
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| 55. | | OLIVEIRA, V. D. de; CARVALHO, H. W. L. de; FUKUDA, W. M. G.; OLIVEIRA, I. R. de; RIBEIRO, S. S. Avaliação de cultivares de mandioca na zona agreste de Sergipe. In: CONGRESSO BRASILEIRO DA MANDIOCA, 12., 2007, Paranavaí. Mandioca: bioenergia, alimento e renda. Botucatu: CERAT- UNESP, [2007].| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Mandioca e Fruticultura. |
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| 58. | | VIEIRA, N. M.; BASTOS, M. do S. R.; BANDEIRA, F. S. M.; PINTO, F. C.; OLIVEIRA, I. R. N. de. Avaliação físico-química de melão cantaloupe irradiado. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS, 21.; SEMINÁRIO LATINO AMERICANO E DO CARIBE DE CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS, 15., 2008, Belo Horizonte. Anais... Belo Horizonte: SBCTA, 2008.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Agroindústria Tropical. |
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| 60. | | NUNES, C. F. P.; OLIVEIRA, I. R. de; STORCH, T. T.; ROMBALDI, C. V.; CHAVES, F. C.; GIRARDI, C. L. Atuação dos genes MDFLA2, MDUDP e MDCOBRA na manutenção da parede celular de maçãs durante o armazenamento refrigerado regular e controlado. In: SIMPÓSIO DE ALIMENTOS, 10., 2018, Passo Fundo. Anais....PAsso Fundo, RS: UPF, 10 e 11 meio 2018.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Uva e Vinho. |
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